艾滋病初期检测方法--酶联免疫吸附法
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    是最常用的HIV抗体检测方法,它具有准确性高、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点,适合于大批标本的检测,是献血员筛选和临床诊断最常用的方法。
    1.方法和原理酶是能够催化化学反应的特殊蛋白质,其催化效力超过所有人造催化剂,ELISA是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反应结合起来的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体以后,既不影响抗原抗体反应的特异性.也不改变酶本身的活性。在ELISA系统中,免疫反应进行以后.酶催化相应的底物水矫显色,再测定有无颜色及颜色的深浅进行分析。发生显色反应提示酶的存在,反映结合或游离的酶标抗体或抗原量的变化。
    第一代和第二代检测HIV抗体的ELLSA方法是间接法,这种方法的原理是将扭v抗原包被到微孔板或其他固相载体上,如标本中含有HIV抗体,则抗体就会和固相载体上的HIV抗原结合,洗涤去除未结合的非特异性抗体,加人醉标记的抗人免疫球蛋白抗体与HIV抗体结合,形成HIV抗原一HN抗体一酶标记的抗人免疫球蛋白抗体复合物,最后加人底物发生酶催化的显色反应,测定光密度值(optical density, OD)。与判断标准进行比较,就可以得出标本中H1V抗体是阳性或阴性的结果了。间接法使用的标记抗体通常是抗人IgG,为了提高敏感性有时也加人抗人1gM。这种方法的特异性由包被于固相载体上的HIV抗原决定,相对来说特异性不高,存在非特异性间题。
    第三代ELTSA试剂的原理是双抗原夹心法,我国目前使用的大多是这种方法。将”N抗原包被到固相载体上.标本中的HIV抗体与抗原结合形成复合物.由于抗体的双价或多价性,它同时还能与其他抗原结合,加人酶标记的同一类HIV抗原分子时.后者就会与固相载体上的抗体结合,形成1IIV抗原一HIV抗体一酶标记HN抗原复合物,最后加人底物发生酶催化的显色反应,测定光密度值.与判断标准进行比较,就可以得知标本中HN抗体是阳性还是阴性
    还有一种ELTSA方法是竞争法。它的主要特点是酶标记抗体是特异性的HIV抗体。标本中的HN抗体与酶标记HIV抗体竟争尚相载体L的HIV抗原,操作时同时加人标本和酶标记HTV抗体.如标本中的抗体浓度高,酶标记HIV抗体就不能与固相载体上的HIV抗原结合或结合得很少,显色反应就较弱,相反,如标本
中的REV抗体含量很少或没有,大量的酶标记HN抗体将与固相载体上的HIV抗原结合.显色反应就很强。因而在竟争法中.光密度值与标本中的抗体含量呈负相关关系。这种方法是将标本与酶标抗体同时加人,需时更短.另外这种方法具有较好的特异性。

 

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